按《體外診斷試劑分析性能(neng)評估指導(dao)原則》，主要的(de)分析性能(neng)評估項(xiang)目有(you)：檢(jian)測限、線(xian)性范(fan)圍(wei)、可報告范(fan)圍(wei)、準確度(du)（回收實驗(yan)）、準確度(du)（方法學(xue)比對）、精密度(du)、干擾(rao)實驗(yan)、穩定性、參考值。目前國際上通(tong)常是以美國臨床實驗(yan)室標準化組(zu)織（CLSI）的相關(guan)標準(zhun)為依據。

產(chan)品(pin)性能評估是產(chan)品(pin)研(yan)(yan)發(fa)(fa)、制定產(chan)品(pin)標準等過程的重要(yao)技術支持(chi)研(yan)(yan)究過程，并(bing)可能對產(chan)品(pin)質(zhi)量造(zao)成(cheng)一定影響。在整(zheng)個(ge)研(yan)(yan)發(fa)(fa)過程中，涉及原料、工藝和思(si)路(lu)，因為行業處(chu)于黃金發(fa)(fa)展階(jie)段，很(hen)少(shao)去關注和優化整(zheng)個(ge)研(yan)(yan)發(fa)(fa)流程，如果沒理順這(zhe)三者關系(xi)，整(zheng)個(ge)研(yan)(yan)發(fa)(fa)流程會陷入盲(mang)目與不可持(chi)續。

剛接觸研發時，一般是以現(xian)有(you)(you)體系，包含穩定的配(pei)方體系（包被緩(huan)沖液(ye)(ye)(ye)、封閉緩(huan)沖液(ye)(ye)(ye)、酶標緩(huan)沖液(ye)(ye)(ye)、校準品稀(xi)釋液(ye)(ye)(ye)、發光底物液(ye)(ye)(ye)）和工藝(yi)流(liu)程，一切(qie)就(jiu)(jiu)著拿來主義，用已(yi)有(you)(you)的配(pei)方，就(jiu)(jiu)著已(yi)有(you)(you)的工藝(yi)，按著流(liu)程操作(zuo)，多數(shu)工作(zuo)用于篩選配(pei)對，分析數(shu)據。

這(zhe)個(ge)入門階(jie)段，一(yi)般至少維(wei)持(chi)2-3年，因為配(pei)(pei)方體(ti)系和(he)工(gong)藝體(ti)系（以下(xia)簡稱工(gong)藝，包含(han)配(pei)(pei)方和(he)體(ti)系）是前人通(tong)過大(da)量研究成果(guo)而建(jian)立的，一(yi)般比較穩定(ding)(ding)，較少修改（就算要改進，權限也是在研發總(zong)監手(shou)中），加上(shang)整個(ge)研發思路(lu)已(yi)經(jing)流程化，不(bu)用思考太多。很多新技術(shu)員(yuan)，通(tong)過這(zhe)種配(pei)(pei)對(dui)篩選后，會從一(yi)定(ding)(ding)數量的配(pei)(pei)對(dui)中篩選出比較合適的配(pei)(pei)對(dui)，進行下(xia)一(yi)環節研發，很容易(yi)就得(de)出，一(yi)個(ge)試劑盒好(hao)壞，基本取(qu)決于原(yuan)料質量，如(ru)果(guo)沒有(you)篩選到好(hao)原(yuan)料，或者碰到難項目，就無從入手(shou)。

我們將原料(liao)、工(gong)藝(yi)和(he)思路(lu)(lu)，細細拆解(jie)來(lai)分析，目的是(shi)理(li)清性能(neng)評估項(xiang)目中，哪(na)(na)些(xie)項(xiang)目是(shi)原料(liao)決(jue)定的，哪(na)(na)些(xie)項(xiang)目是(shi)工(gong)藝(yi)決(jue)定的，哪(na)(na)些(xie)項(xiang)目是(shi)兩者共(gong)同影響的，促(cu)進研發(fa)思路(lu)(lu)的形成與成熟，希望能(neng)夠(gou)拋磚引玉。

一．原料

我們將免疫(yi)試劑中(zhong)關鍵原(yuan)料提煉出來，分為(wei)兩塊：抗原抗體和特殊成分。

1、抗(kang)原抗(kang)體 

免(mian)疫試劑一般可以分(fen)為兩個過程：免(mian)疫反(fan)應(ying)和顯色反(fan)應(ying)。免(mian)疫反(fan)應(ying)是核(he)心，將待測(ce)物特異性地從復雜樣本中分(fen)離出來，這一環節的(de)(de)好壞，直接決定整個試劑的(de)(de)核(he)心質量。

在工業生(sheng)產(chan)上，免(mian)疫檢測用的抗體(ti)，一般是通過(guo)工程菌表達抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)片段，免疫動物，進行多(duo)克隆或者單(dan)克隆抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)制(zhi)備，然(ran)(ran)后得到的抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)，進行配對(dui)篩選(xuan)，選(xuan)出合適的配對(dui)應用于免疫檢測(ce)。在這個(ge)過程中，由(you)于待測(ce)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)一般都是天(tian)然(ran)(ran)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)（少數科研檢測(ce)重組(zu)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)），而制(zhi)備和篩選(xuan)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)一般又是使(shi)用重組(zu)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)，因此會帶來(lai)很多(duo)應用問題，這個(ge)對(dui)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)制(zhi)備商(shang)來(lai)說(shuo)，值得重視(shi)。

2、特殊成分 

免疫(yi)反應做為一個脆弱的(de)非(fei)共價鍵結合過(guo)程，整(zheng)個反應受(shou)時間、干擾物、橋(qiao)聯物、結(jie)構(gou)類似物等影(ying)響，為消除(chu)這些(xie)不良影(ying)響，一(yi)般在緩(huan)沖體系中會增加一(yi)些(xie)特殊(shu)成分(fen)，這些(xie)特殊(shu)成分(fen)我們(men)定義為次要原料，在工藝中詳述。

二．工藝

工藝包含配方體系和工藝流(liu)程，兩者(zhe)相輔相成(cheng)。所有的(de)配方和工藝，是為保(bao)障和提(ti)高(gao)產品性(xing)能而設計的(de)，當原料無(wu)法滿足產品性(xing)能要求時，如何通(tong)過配方工藝來提(ti)高(gao)，或者(zhe)說，哪(na)些(xie)性(xing)能能通(tong)過配方工藝來提(ti)高(gao)，如何來提(ti)高(gao)，哪(na)些(xie)只能由(you)原料決定，這個在(zai)我們研發職業(ye)生涯(ya)中，要不斷積累與完善。

1、配方體系 

配方體(ti)系(xi)可以拆解為(wei)緩沖(chong)體(ti)系(xi)和改進體(ti)系(xi)。

（1）緩(huan)沖體系(xi) 一般的(de)緩(huan)沖體系(xi)，在教科書、產品(pin)說(shuo)明書、論文中(zhong)均可見到(dao)，主要包含離子對類型、離子濃度、pH值等內(nei)容，非保(bao)密配方，比較容易理解與掌握。

（2）改進(jin)體(ti)系 因為免(mian)疫反(fan)應的非共價(jia)鍵(jian)結合的脆(cui)弱性，依靠一個(ge)簡單緩沖體(ti)系，要獲得很好的反(fan)應結果(guo)，是比較(jiao)困難(nan)的，針對(dui)這(zhe)(zhe)種(zhong)問題，科學家(jia)設計了各種(zhong)改進(jin)體(ti)系，這(zhe)(zhe)些體(ti)系下(xia)面(mian)，又有各種(zhong)方法產生。

A、降低本底體(ti)系(xi)

a、使用合(he)適的包被、標記濃度(du)，一(yi)般采用棋盤滴定確定。

b、加(jia)入(ru)增加(jia)溶解率，降低非特異吸附的物質，如曲(qu)通(tong)、吐溫。

B、減少干擾體系

a、加入正常鼠血清或者鼠IgG，降(jiang)低人抗(kang)鼠抗(kang)體影響

b、加入阻斷劑，降低(di)類風濕因子干擾

C、減少前帶效應體系

a、適當提高包被(bei)和標(biao)記濃度，兼顧(gu)本底

b、加入檢測抗體裸抗，兼顧靈敏度

D、增(zeng)加靈敏度體系

a、加入曲(qu)通、吐(tu)溫等

b、加(jia)入特殊物質，如(ru)S19

E、提高(gao)檢出(chu)率體系(xi)

a、多個抗體聯合使用，如CnTI項目

F、提高穩定性體系

a、緩沖液加入保護性蛋白、糖類、小分子化(hua)合物

G、等等其他體系 隨著研究深(shen)入(ru)，這個目錄會不斷增加，相應的方(fang)法也會不斷增多。

2、工藝流程 

工藝(yi)(yi)流程，又包含生(sheng)產工藝(yi)(yi)流程和(he)試(shi)劑盒檢測操作工藝(yi)(yi)流程兩個方面。

（1）生產工(gong)(gong)藝流程 生產工(gong)(gong)藝流程，對(dui)(dui)整個的(de)產品性能(neng)(neng)，有非(fei)常大(da)的(de)影響(xiang)，比(bi)如預包被板制備工(gong)(gong)藝，包被、封閉、干燥的(de)溫度、時間(jian)，對(dui)(dui)整個性能(neng)(neng)影響(xiang)很大(da)，需要研發摸索。

（2）檢測操作(zuo)(zuo)工藝(yi)(yi)流程(cheng) 相比生產工藝(yi)(yi)，試(shi)劑(ji)盒的(de)檢測操作(zuo)(zuo)工藝(yi)(yi)，對(dui)性(xing)能影響更大，一步法、兩步法，加樣量，加樣順序(xu)，溫育溫度，溫育時間(jian)。

三．思路

我們分析原料與工藝，就是為(wei)了找到一個合適的(de)研(yan)發(fa)(fa)思路，指(zhi)導研(yan)發(fa)(fa)過(guo)程，提高研(yan)發(fa)(fa)效率(lv)，整個研(yan)發(fa)(fa)思路，我們再(zai)劃(hua)分為(wei)產(chan)品研(yan)發(fa)(fa)和改進研(yan)發(fa)(fa)兩個問題。

1、產品研發 

產品研發(fa)是一(yi)(yi)個從無到有(you)的過(guo)程(cheng)，多數是根據市面上(shang)已有(you)的試劑(ji)，研發(fa)自己(ji)公(gong)司(si)沒有(you)的產品。這(zhe)(zhe)個過(guo)程(cheng)占(zhan)研發(fa)的大頭，我們再將其細分(fen)為初步研發(fa)、預臨床實驗(yan)和(he)穩定性測試三個過(guo)程(cheng)。所(suo)有(you)的研發(fa)，我們都必須知道，一(yi)(yi)個性能項目，他是怎么評估的，哪(na)些因素會影(ying)響這(zhe)(zhe)個性能，如何(he)改進，我們以雙抗體夾心為例列舉。

（1）初步研(yan)發(fa) 初步研(yan)發(fa)時(shi)，一(yi)般(ban)重(zhong)點(dian)強調三(san)個活性成(cheng)分(fen)：包(bao)被抗體(ti)、檢測抗體(ti)、校準品(pin)(pin)。包(bao)被抗體(ti)和檢測抗體(ti)，會有一(yi)個經驗濃(nong)度，校準品(pin)(pin)一(yi)般(ban)用合適基質，將抗原或者高(gao)值樣本進行梯度稀釋，獲取的(de)梯度濃(nong)度進行第三(san)方(fang)賦值，追溯到國(guo)際(ji)、國(guo)家(jia)或者企業標(biao)準品(pin)(pin)。

初步(bu)研(yan)發多數(shu)是(shi)在做配對(dui)篩選(xuan)，只需要用檢測限、線性范(fan)圍(wei)、可(ke)報告范(fan)圍(wei)這三個(ge)性能評估項目，即(ji)可(ke)篩選(xuan)出候選(xuan)配對(dui)。比如拿到(dao)10株抗(kang)體(ti)，可(ke)以做成100個(ge)配對(dui)，進行篩選(xuan)，選(xuan)出初步(bu)可(ke)用的候選(xuan)配對(dui)若(ruo)干對(dui)。

對初篩的候(hou)(hou)選(xuan)(xuan)配(pei)對，進行精密度、準確度（回收實(shi)(shi)驗(yan)(yan)）、干擾實(shi)(shi)驗(yan)(yan)評估，通(tong)過這些實(shi)(shi)驗(yan)(yan)，再二次篩選(xuan)(xuan)候(hou)(hou)選(xuan)(xuan)配(pei)對。

（2）預臨床實(shi)驗(yan)(yan) 不涉及臨床血清樣本的(de)(de)初步研(yan)發(fa)都完成后，獲得(de)一定(ding)的(de)(de)候選配(pei)對，進行(xing)預臨床實(shi)驗(yan)(yan)，主要是評估準(zhun)確度(du)（方法(fa)學(xue)比較）和參考值區間。

（3）穩定(ding)性測試 通過上面兩個(ge)步驟(zou)，試劑盒初(chu)步成型，活性組分（包含預包被板、校準(zhun)品(pin)、酶標抗體）的穩定(ding)性，需(xu)要一一評(ping)價與改進，直到滿(man)足要求。

2、改進研發

整(zheng)個試(shi)劑盒的(de)研發(fa)(fa)，最終就(jiu)是(shi)(shi)(shi)為(wei)了檢測臨(lin)床(chuang)(chuang)血(xue)清樣本(ben)(ben)，所(suo)有的(de)分(fen)析性能評估項目，也是(shi)(shi)(shi)為(wei)這(zhe)個目的(de)而設計，但是(shi)(shi)(shi)在整(zheng)個研發(fa)(fa)過程(cheng)中，不管是(shi)(shi)(shi)預(yu)臨(lin)床(chuang)(chuang)試(shi)驗，還(huan)是(shi)(shi)(shi)正(zheng)式臨(lin)床(chuang)(chuang)試(shi)驗，配(pei)對測試(shi)的(de)臨(lin)床(chuang)(chuang)血(xue)清樣本(ben)(ben)量，是(shi)(shi)(shi)非常有限(xian)的(de)，頂(ding)多就(jiu)算是(shi)(shi)(shi)完成一個小試(shi)生產。到真正(zheng)產品上(shang)市和(he)臨(lin)床(chuang)(chuang)應用時，隨著(zhu)樣本(ben)(ben)量的(de)擴(kuo)大，很多之前(qian)沒有暴(bao)露的(de)問題，都會集中暴(bao)露，必須收集足夠數據，進行改進研發(fa)(fa)。

一(yi)般這個(ge)階段(duan)，就(jiu)是針對臨(lin)(lin)床不符合的(de)樣本(ben)，特別是假(jia)陽(yang)性(xing)、假(jia)陰性(xing)樣本(ben)，要對樣本(ben)進行(xing)不同廠家試劑檢測比(bi)對，成分(fen)(fen)分(fen)(fen)析(xi)等等，這個(ge)過程在(zai)預(yu)臨(lin)(lin)床和正(zheng)式(shi)(shi)臨(lin)(lin)床都會(hui)做，在(zai)預(yu)臨(lin)(lin)床和正(zheng)式(shi)(shi)臨(lin)(lin)床時，還要對檢測值嚴(yan)重不符，但并未導致假(jia)陽(yang)、假(jia)陰性(xing)的(de)樣本(ben)，進行(xing)分(fen)(fen)析(xi)。