1，標準品的制備

標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)(pin)的(de)制備(bei)是非常復(fu)雜的(de)問題，也是標(biao)記免(mian)疫分(fen)析中(zhong)比較難于制備(bei)的(de)一個成(cheng)分(fen)。以下討論的(de)是實(shi)驗室標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(或(huo)商品(pin)(pin)化試(shi)劑中(zhong)標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)(pin))的(de)制備(bei)。

（1）基質的制備：如前所述，作為標準品的介質(基質)成分應與被測樣品相同。對大多數用于測定血清中某物質的標準品，應用不含被測物質的零血清制備，以求反應的介質環境相當。但有時零值血清的制備十分困難，所以有些標準品用適當的緩沖液制備，并在緩沖液中加入一定量的載體蛋白(一般用1%～2%的牛血清白蛋白)，以便使其與樣品的介質環境相近。

零值血清的制備方法有：

A、吸附法：血清中小分子物質如三碘甲狀腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)等，可用活性炭吸附去除。這種方法簡便，但待測物質難以清除干凈，而且大分子活性物質不能用此法進行制備。

B、反復凍融法：對大分子活性物質可選用低值血清，經反復凍融使被測物質失活。用這種方法可使某些蛋白類激素大部分失活，但也難以得到真正的零值血清。

C、親和層析法：用特異性抗體制備親和層析柱，用以吸附被測抗原。用這種方法可以得到高質量的零值血清，但本法比較復雜而且成本也高。

（2）標準物純品的選擇：應選擇高化學純和高免疫純的純品作標準品。其中免疫純尤為重要，在標準品中不應含有與被測物質有交叉反應的物質。

（3）標準品的制備：先用零值血清配置高濃度的標準品，然后根據實驗系統的要求，用零值血清將高值血清稀釋至應有的濃度，制成符合預定要求的，由不同濃度組成的系列標準品。

2，標準品的鑒定

（1）免疫活性的鑒定：選用高特異性的(de)抗血清分別作公認(ren)標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)(如WHO的(de)國際參考品(pin)或(huo)國家標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin))的(de)待鑒定標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)的(de)劑量反應曲線，并觀察兩(liang)(liang)條曲(qu)線的(de)(de)平行性。如兩(liang)(liang)條劑(ji)量反應曲(qu)線平行，說(shuo)明兩(liang)(liang)種物(wu)質(zhi)對同(tong)一抗體有相同(tong)的(de)(de)親和力，即(ji)二者是同(tong)質(zhi)性物(wu)質(zhi)。如兩(liang)(liang)條劑(ji)量反應曲(qu)線不平行，說(shuo)明兩(liang)(liang)種物(wu)質(zhi)具有異(yi)質(zhi)性，因而這一待鑒定的(de)(de)標(biao)準(zhun)品是不能使用的(de)(de)。

（2）濃度的標定：用已鑒定過的，免疫活性合格的標準品，與公認的標準品作濃度相同的劑量反應曲線。此時，兩條劑量反應曲線應該是基本重合的。如果兩者平行但不重合，則取兩條劑量反應曲線的50%結合處的相應劑量( ED50 )計算二者的換算系數，然后調整待鑒定標準品的濃度，直至使兩條劑量反應曲線完全或基本重合為止。

3，標準品的計量

許多(duo)小分子抗原(yuan)或半抗原已能得到(dao)(dao)純品(pin)或(huo)進行合成，它們對作為標準品(pin)的(de)要求可以得到(dao)(dao)基(ji)本(ben)的(de)滿足，其計量(liang)(liang)(liang)多直(zhi)接用單位(wei)(wei)體積中(zhong)的(de)重量(liang)(liang)(liang)表示，如mg / ml、ng / ml 、pg / ml等。最近WHO推薦用質(zhi)量(liang)(liang)(liang)單位(wei)(wei)取代重量(liang)(liang)(liang)單位(wei)(wei)，即mol / L、mmol / L、或(huo)nmol / L等。對大分子的(de)活(huo)性(xing)(xing)物(wu)質(zhi)則比較復(fu)雜。由于得不到(dao)(dao)絕對的(de)純品(pin)，故(gu)很(hen)難直(zhi)接用單位(wei)(wei)體積中(zhong)的(de)重量(liang)(liang)(liang)或(huo)單位(wei)(wei)體積中(zhong)的(de)質(zhi)量(liang)(liang)(liang)計量(liang)(liang)(liang)。因(yin)此，常用該物(wu)質(zhi)的(de)生(sheng)物(wu)活(huo)性(xing)(xing)單位(wei)(wei)表示，如IU / L、mIU / L等。

4，標準品的穩定性與保存

如(ru)前所述，為保(bao)證(zheng)檢(jian)測的連續可比性，每批(pi)標準(zhun)品(pin)(pin)應(ying)有(you)相當大的量，以保(bao)證(zheng)能在(zai)(zai)較長時間內使用。因此，每批(pi)標準(zhun)品(pin)(pin)應(ying)在(zai)(zai)適當的條件下(xia)保(bao)存，使其免(mian)疫活(huo)性和濃度保(bao)持穩(wen)定(ding)。

4.1 影響標準品穩定的因素：

（1）基質中的酶、細菌污染、pH的變化、氧化、潮濕等因素都可以導致標準品的變性，而且這些變化可因高溫和光照加速。

（2）在保存過程中發生聚合反應等分子結構的變化，可使標準品失活。

（3）容器內壁的吸附作用和溶劑的蒸發可造成標準品濃度的改變。

（4）保存條件不適當也可以影響標準品的穩定性，如反復的凍融可降低標準品的免疫活性等。

4.2 標準品的保存方法

（1）冷凍干燥法：冷凍干燥對標準品的濃度和免疫活性無明顯的影響，是目前最常用的保存方法。冷凍干燥制品在低溫下，可在較長的時間內保持穩定。但應用冷凍干燥制品時，復溶體積的準確度十分重要。因此，要用經過校準的量器準確的復溶，以減少標準品的濃度誤差。

（2）在標準品中加(jia)一定(ding)量的防(fang)腐劑可減(jian)少細菌污染(ran)的影響。

（3）密閉真空保(bao)(bao)存或(huo)充入惰性氣體等方法也(ye)可以增(zeng)加標(biao)準品的(de)穩定(ding)性。目(mu)前最(zui)常用的(de)方法是(shi)：在標(biao)準品中加入少量的(de)防腐劑(如(ru)0.1%疊氮鈉或(huo)0.1%硫柳(liu)汞)，冷(leng)凍干燥后(hou)密封，并在低溫(wen)下保(bao)(bao)存。但(dan)應注意(yi)，一旦(dan)復(fu)溶后(hou)應放低溫(wen)保(bao)(bao)存，并不(bu)得反(fan)復(fu)凍溶。復(fu)溶后(hou)的(de)標(biao)準品其(qi)有效期明顯縮(suo)短(duan)，一般不(bu)超過6～8周，有些物質可能更短(duan)。