基質效應(matrix effect)按NCCLS文件的定義,指(1)標本中除分(fen)析(xi)(xi)物(wu)(wu)以外的(de)(de)其他成分(fen)對分(fen)析(xi)(xi)物(wu)(wu)測定(ding)值(zhi)的(de)(de)影(ying)(ying)響。(2)基(ji)質對分(fen)析(xi)(xi)方法準確(que)測定(ding)分(fen)析(xi)(xi)物(wu)(wu)的(de)(de)能力的(de)(de)干擾。廣義說來,基(ji)質效應也(ye)應包(bao)括已(yi)知(zhi)的(de)(de)干擾物(wu)(wu)(如Chol測定(ding)中膽紅素、血(xue)紅蛋白、抗壞(huai)血(xue)酸等(deng)都(dou)是干擾物(wu)(wu)),但(dan)只將基(ji)質效應限于生物(wu)(wu)材料中未知(zhi)或未定(ding)性(xing)的(de)(de)物(wu)(wu)質或因素(如粘度、pH等(deng))的(de)(de)影(ying)(ying)響。
化學分(fen)析(xi)(xi)中,基質(zhi)指的(de)(de)(de)是樣(yang)品(pin)中被分(fen)析(xi)(xi)物(wu)以外的(de)(de)(de)組分(fen)。基質(zhi)常(chang)常(chang)對分(fen)析(xi)(xi)物(wu)的(de)(de)(de)分(fen)析(xi)(xi)過程(cheng)有顯著的(de)(de)(de)干(gan)擾,并影(ying)(ying)響分(fen)析(xi)(xi)結果的(de)(de)(de)準確性。例(li)如,溶液的(de)(de)(de)離子(zi)強度會對分(fen)析(xi)(xi)物(wu)活度系數有影(ying)(ying)響,這(zhe)些影(ying)(ying)響和干(gan)擾被稱為基質(zhi)效應(matrix effect)。
目前最常用的去除(chu)基質(zhi)(zhi)效應(ying)的方(fang)法是,通過已知(zhi)分析物濃(nong)度(du)的標準樣(yang)(yang)品(pin),同時盡可能(neng)保持樣(yang)(yang)品(pin)中基質(zhi)(zhi)不變,建立(li)一個校正曲線。固(gu)體樣(yang)(yang)品(pin)同樣(yang)(yang)有很強的基質(zhi)(zhi)效應(ying),對(dui)其(qi)校正也尤為(wei)重要。
對于(yu)復雜的(de)(de)或者未(wei)知組(zu)分(fen)基質的(de)(de)影響(xiang),可以采用(yong)標準(zhun)添(tian)加(jia)法。在這一方法中(zhong),需要測量和記錄樣(yang)品的(de)(de)響(xiang)應值。進一步(bu)加(jia)入少量的(de)(de)標準(zhun)溶液,再次記錄樣(yang)品的(de)(de)響(xiang)應值。理想地說(shuo)來,標準(zhun)添(tian)加(jia)應該(gai)(gai)增加(jia)分(fen)析物的(de)(de)濃度(du)1.5到3倍,同時(shi)幾次添(tian)加(jia)的(de)(de)溶液也應該(gai)(gai)保持一致(zhi)。使用(yong)的(de)(de)標準(zhun)樣(yang)品的(de)(de)體(ti)積應該(gai)(gai)盡可能小,盡量降低過程中(zhong)對基質的(de)(de)影響(xiang)。
1.基質效應的來源
基(ji)質(zhi)效(xiao)應主要來(lai)源(yuan)于(yu)生(sheng)物(wu)(wu)樣品(pin)的內源(yuan)性(xing)組(zu)分,經前處理后仍存在于(yu)提取液(ye)中(zhong)。包括離(li)(li)子顆(ke)粒物(wu)(wu)成(cheng)分(電解質(zhi)、鹽類(lei)(lei))、強極(ji)性(xing)化(hua)合(he)物(wu)(wu)(酚類(lei)(lei)、色(se)素(su))和各種有(you)(you)機(ji)化(hua)合(he)物(wu)(wu)(糖(tang)類(lei)(lei)、胺類(lei)(lei)、尿素(su)、脂類(lei)(lei)、肽類(lei)(lei)及(ji)其分析目標物(wu)(wu)的同(tong)類(lei)(lei)物(wu)(wu)及(ji)其代謝物(wu)(wu))。其中(zhong)磷脂是最主要的內源(yuan)性(xing)組(zu)分, 其對電噴(pen)霧電離(li)(li)(ESI)和大氣壓化(hua)學電離(li)(li) (APCI)均會產(chan)(chan)生(sheng)離(li)(li)子抑制作(zuo)用。含有(you)(you)P=O、-O-CO-NH-、OH、R-NH-、-N=、-NH-CO-NH -等基(ji)團(tuan)的農藥通常表現出較強的基(ji)質(zhi)效(xiao)應。由樣品(pin)處理過程引入(ru)的外源(yuan)性(xing)組(zu)分,同(tong)樣會產(chan)(chan)生(sheng)基(ji)質(zhi)效(xiao)應。主要包括無機(ji)離(li)(li)子、緩沖溶液(ye)、有(you)(you)機(ji)酸、離(li)(li)子對試劑、增塑劑、表面活性(xing)劑殘留、固(gu)相萃取(SPE)小柱(zhu)材料及(ji)色(se)譜柱(zhu)固(gu)定相流失物(wu)(wu)等。
2、基質效應評價方法
2.1較(jiao)簡單的采用相(xiang)對響應值法
A:在純溶劑中農藥的響應值
B:樣品基質中添加的(de)相同(tong)含量(liang)農藥(yao)響應值(zhi)
基質效應(ying)Matrix Effect (%)=B/A×100
2.1比較復雜的標準曲線測定法
配制3組(zu)(zu)(zu)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)曲線。第(di)(di)(di)1組(zu)(zu)(zu)用有機溶(rong)劑配制成含系(xi)列濃(nong)度待(dai)(dai)(dai)測(ce)組(zu)(zu)(zu)分(fen)和(he)(he)內(nei)(nei)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)的(de)(de)(de)(de)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)曲線,可(ke)以做5個重(zhong)復。第(di)(di)(di)2組(zu)(zu)(zu)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)曲線是將(jiang)5種(zhong)不(bu)同(tong)來源(yuan)或不(bu)同(tong)品(pin)種(zhong)的(de)(de)(de)(de)的(de)(de)(de)(de)空白(bai)樣品(pin)經(jing)提(ti)(ti)取后加(jia)入與(yu)第(di)(di)(di)1組(zu)(zu)(zu)相同(tong)系(xi)列濃(nong)度的(de)(de)(de)(de)待(dai)(dai)(dai)測(ce)組(zu)(zu)(zu)分(fen)和(he)(he)內(nei)(nei)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)后制得。第(di)(di)(di)3組(zu)(zu)(zu)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)曲線采用與(yu)第(di)(di)(di)2組(zu)(zu)(zu)相同(tong)的(de)(de)(de)(de)空白(bai)樣品(pin)在提(ti)(ti)取前加(jia)入與(yu)第(di)(di)(di)1組(zu)(zu)(zu)相同(tong)系(xi)列濃(nong)度的(de)(de)(de)(de)待(dai)(dai)(dai)測(ce)組(zu)(zu)(zu)分(fen)和(he)(he)內(nei)(nei)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)后再(zai)經(jing)提(ti)(ti)取后制得。通過比(bi)較(jiao)3組(zu)(zu)(zu)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)曲線待(dai)(dai)(dai)測(ce)組(zu)(zu)(zu)分(fen)的(de)(de)(de)(de)絕對響(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)應(ying)(ying)值(zhi)(zhi)、待(dai)(dai)(dai)測(ce)組(zu)(zu)(zu)分(fen)與(yu)內(nei)(nei)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)的(de)(de)(de)(de)響(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)應(ying)(ying)值(zhi)(zhi)比(bi)值(zhi)(zhi)和(he)(he)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)曲線的(de)(de)(de)(de)斜率(lv),可(ke)以確(que)定(ding)基(ji)質(zhi)效應(ying)(ying)對定(ding)量的(de)(de)(de)(de)影(ying)響(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)。第(di)(di)(di)1組(zu)(zu)(zu)測(ce)定(ding)結果可(ke)評價整個系(xi)統的(de)(de)(de)(de)重(zhong)復性。第(di)(di)(di)2組(zu)(zu)(zu)測(ce)定(ding)結果同(tong)第(di)(di)(di)1組(zu)(zu)(zu)測(ce)定(ding)結果相比(bi),若待(dai)(dai)(dai)測(ce)組(zu)(zu)(zu)分(fen)響(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)應(ying)(ying)值(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)相對標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)偏(pian)差明(ming)顯增加(jia),表(biao)明(ming)存在基(ji)質(zhi)效應(ying)(ying)的(de)(de)(de)(de)影(ying)響(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)。對第(di)(di)(di)3組(zu)(zu)(zu)測(ce)定(ding)結果,若待(dai)(dai)(dai)測(ce)組(zu)(zu)(zu)分(fen)響(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)應(ying)(ying)值(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)相對標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)偏(pian)差明(ming)顯增加(jia),表(biao)明(ming)存在基(ji)質(zhi)效應(ying)(ying)和(he)(he)提(ti)(ti)取回(hui)收率(lv)因(yin)樣品(pin)來源(yuan)不(bu)同(tong)而產生的(de)(de)(de)(de)共同(tong)影(ying)響(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)。
3.基質效應的評估及如何避免基質效應的發生
基(ji)(ji)質(zhi)(zhi)(zhi)效(xiao)(xiao)應所致分析(xi)結果的偏差(cha)稱為基(ji)(ji)質(zhi)(zhi)(zhi)偏差(cha)(matrix bias)。用(yong)作校準物質(zhi)(zhi)(zhi)或質(zhi)(zhi)(zhi)控物,經過(guo)處理(li)的混合血清(qing)(qing),由(you)于血清(qing)(qing)機(ji)制(zhi)的理(li)化(hua)性質(zhi)(zhi)(zhi)在(zai)(zai)處理(li)過(guo)程中(zhong)的改變(bian),在(zai)(zai)常規測定上往往出現基(ji)(ji)質(zhi)(zhi)(zhi)偏差(cha)。基(ji)(ji)質(zhi)(zhi)(zhi)偏差(cha)的出現也(ye)與分析(xi)系統(包(bao)括(kuo)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)、試劑(ji)及所用(yong)儀器設備)有關,所以有人將基(ji)(ji)質(zhi)(zhi)(zhi)效(xiao)(xiao)應定性為方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)、材料(liao)與基(ji)(ji)質(zhi)(zhi)(zhi)的特異性反應。在(zai)(zai)基(ji)(ji)質(zhi)(zhi)(zhi)效(xiao)(xiao)應的評估方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)方(fang)(fang)面,通常認(ren)為測定新鮮(xian)(或冰凍)血清(qing)(qing)無基(ji)(ji)質(zhi)(zhi)(zhi)效(xiao)(xiao)應,決(jue)定性方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)或參考方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)也(ye)無基(ji)(ji)質(zhi)(zhi)(zhi)效(xiao)(xiao)應。
參考(kao)訪(fang)法(fa)(fa)與常規(gui)方(fang)(fang)法(fa)(fa)測定同一批(pi)新鮮血清的(de)結果一致,表(biao)示這(zhe)項(xiang)常規(gui)方(fang)(fang)法(fa)(fa)沒有方(fang)(fang)法(fa)(fa)誤差(cha),如有差(cha)異則(ze)代表(biao)常規(gui)方(fang)(fang)法(fa)(fa)的(de)“校(xiao)準(zhun)偏差(cha)”。用(yong)參考(kao)方(fang)(fang)法(fa)(fa)與常規(gui)方(fang)(fang)法(fa)(fa)測制備物(如室間質評樣品)時往往得不(bu)一致結果,這(zhe)種差(cha)異稱作調(diao)查偏差(cha)。調(diao)查偏差(cha)與校(xiao)準(zhun)偏差(cha)之差(cha)即基質偏差(cha)。
減少基質效應(ying)的主要措(cuo)施包括:
3.1、改進室間質評樣品(pin),使其作用更像新鮮(xian)人血清(qing);
3.2、改進儀器設計及試劑組成;
3.3、選擇方法及方法學參(can)數(shu),使其適應性(xing)更(geng)強,且容易掌握,對制(zhi)備物(校準物、室間質(zhi)(zhi)評樣(yang)品與質(zhi)(zhi)控物)基質(zhi)(zhi)的確切(qie)性(xing)質(zhi)(zhi)不敏感。
天津健博生物科技有限公(gong)司,人布魯氏菌檢(jian)測(ce),碳(tan)青霉烯(xi)酶檢(jian)測(ce),體外診斷試(shi)劑(ji)
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