我們免疫分(fen)析中(zhong)(zhong)出現(xian)問題的(de)(de)(de)(de)一(yi)個常(chang)見原(yuan)因是(shi)干擾(rao)性(xing)(xing)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)，如眾(zhong)所周知(zhi)的(de)(de)(de)(de)人抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)鼠抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)、一(yi)般的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)動物(wu)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)、嗜異性(xing)(xing)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)或(huo)類(lei)風濕因子。有趣的(de)(de)(de)(de)是(shi)，由于今(jin)天的(de)(de)(de)(de)治療性(xing)(xing)單克隆抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)藥物(wu)幾乎(hu)完(wan)全是(shi)人源(yuan)化的(de)(de)(de)(de)，所以(yi)真正(zheng)的(de)(de)(de)(de)的(de)(de)(de)(de)流行(xing)率正(zheng)在(zai)(zai)穩步(bu)下(xia)降。抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)引(yin)起的(de)(de)(de)(de)干擾(rao)在(zai)(zai)未來仍將(jiang)具有高(gao)度的(de)(de)(de)(de)臨(lin)床相關性(xing)(xing)，并且似乎(hu)進一(yi)步(bu)增(zeng)加患病率。一(yi)般來說，這些(xie)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)干擾(rao)主要發生在(zai)(zai)夾心法的(de)(de)(de)(de)免疫分(fen)析中(zhong)(zhong)，即基于捕(bu)獲抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)和檢測(ce)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)。干擾(rao)性(xing)(xing)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)可以(yi)交聯捕(bu)獲抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)和檢測(ce)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)，導致(zhi)分(fen)析中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)高(gao)讀數，從而導致(zhi)假陽性(xing)(xing)結果。或(huo)者，它們可以(yi)阻止(zhi)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)與檢測(ce)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)結合，甚至引(yin)起檢測(ce)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)聚集，導致(zhi)假陰性(xing)(xing)結果。

我(wo)們(men)在免疫診斷(duan)試劑(ji)(ji)研發(fa)過(guo)程(cheng)中，往往會加入阻斷(duan)劑(ji)(ji)，讓(rang)整個反應體系靈敏度更優，今天就來聊(liao)聊(liao)阻斷(duan)劑(ji)(ji)的(de)(de)作用原(yuan)理、它們(men)的(de)(de)性質特(te)點(dian)和(he)如(ru)何選擇(ze)使用他們(men)。每次(ci)檢測(ce)時阻斷(duan)劑(ji)(ji)的(de)(de)最有效濃度也(ye)必(bi)須仔細滴定。對于(yu)給定的(de)(de)分析和(he)干擾樣品組(zu)合，必(bi)須進行非常嚴(yan)格的(de)(de)測(ce)試，才(cai)能(neng)找到(dao)合適的(de)(de)HAMA阻斷(duan)劑(ji)(ji)。

一，原理概念

阻斷劑(ji)(ji)是(shi)(shi)藥理學術語(yu)，一般指的(de)(de)就是(shi)(shi)拮(jie)抗劑(ji)(ji)。指能(neng)與(yu)受體(ti)結(jie)合(he)，并能(neng)阻止激動劑(ji)(ji)產(chan)生效應的(de)(de)一類配體(ti)物質(zhi)。拮(jie)抗劑(ji)(ji)對(dui)相應受體(ti)有(you)親和性(xing)，但沒(mei)有(you)效能(neng)，從而抑制(zhi)了激動劑(ji)(ji)對(dui)受體(ti)的(de)(de)作用。拮(jie)抗劑(ji)(ji)可以結(jie)合(he)受體(ti)的(de)(de)活性(xing)位點(dian)(dian)，也可以結(jie)合(he)別構位點(dian)(dian)，甚至(zhi)單獨結(jie)合(he)通常沒(mei)有(you)生物調節作用的(de)(de)位點(dian)(dian)來(lai)達到效果(guo)。拮(jie)抗劑(ji)(ji)和受體(ti)結(jie)合(he)性(xing)質(zhi)不同，所(suo)以結(jie)合(he)時間有(you)長有(you)短，結(jie)合(he)的(de)(de)可逆性(xing)也有(you)不同。

它分為競爭(zheng)性(xing)拮(jie)抗劑和非競爭(zheng)性(xing)拮(jie)抗劑等類型。大(da)部(bu)分藥物拮(jie)抗劑都與(yu)內源性(xing)配(pei)體或(huo)底物競爭(zheng)受體結合位點來達到效果(guo)。

受體是可被配體結合而激活的大型蛋白質分子。受體可以結合在細胞膜上，也可存在于細胞內部，比如在細胞核或線粒體中。受體在活性位點與配體以非共價鍵結合，一個受體上可以有多個結合不同配體的位點。配體和受體在活性位點或別構位點結合后，都可以調節受體的活性。拮抗劑可以通過結合活性位點、別構位點，或者單獨結合通常不參與生物調節的位點來產生效果。

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二，性質選擇

1.效能和效價強度

根據(ju)定義(yi)，拮(jie)抗(kang)劑(ji)(ji)沒有(you)激活(huo)所結合的(de)(de)(de)(de)受體的(de)(de)(de)(de)效(xiao)(xiao)(xiao)能(neng)，，因為一(yi)旦二者結合起來，拮(jie)抗(kang)劑(ji)(ji)就抑制(zhi)了激動(dong)(dong)劑(ji)(ji)(包括部分激動(dong)(dong)劑(ji)(ji)和反激動(dong)(dong)劑(ji)(ji))的(de)(de)(de)(de)功(gong)能(neng)。在拮(jie)抗(kang)劑(ji)(ji)功(gong)能(neng)評估中，使用量(liang)效(xiao)(xiao)(xiao)曲(qu)線(xian)量(liang)度(du)一(yi)定濃(nong)(nong)度(du)的(de)(de)(de)(de)拮(jie)抗(kang)劑(ji)(ji)抑制(zhi)激動(dong)(dong)劑(ji)(ji)效(xiao)(xiao)(xiao)應的(de)(de)(de)(de)能(neng)力。通(tong)常把拮(jie)抗(kang)劑(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)EC50值(zhi)作為它的(de)(de)(de)(de)效(xiao)(xiao)(xiao)價(jia)(jia)強(qiang)(qiang)度(du)。EC50值(zhi)是指(zhi)能(neng)抑制(zhi)激動(dong)(dong)劑(ji)(ji)最大(da)生物(wu)反應一(yi)半的(de)(de)(de)(de)拮(jie)抗(kang)劑(ji)(ji)濃(nong)(nong)度(du)。EC50非常有(you)助于比較有(you)相似效(xiao)(xiao)(xiao)能(neng)和量(liang)效(xiao)(xiao)(xiao)曲(qu)線(xian)的(de)(de)(de)(de)藥品的(de)(de)(de)(de)效(xiao)(xiao)(xiao)價(jia)(jia)強(qiang)(qiang)度(du)。這個值(zhi)越(yue)低(di)，拮(jie)抗(kang)劑(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)效(xiao)(xiao)(xiao)價(jia)(jia)強(qiang)(qiang)度(du)就越(yue)好(hao)，抑制(zhi)生物(wu)反應所需(xu)的(de)(de)(de)(de)藥物(wu)濃(nong)(nong)度(du)就越(yue)低(di)，副作用也越(yue)少。

2，親和性及其測定

拮(jie)(jie)抗(kang)劑(ji)(ji)對(dui)(dui)受體的(de)(de)(de)親(qin)和(he)(he)性(xing)就是它與受體結合(he)的(de)(de)(de)能力，以Ki表示，決定(ding)(ding)了拮(jie)(jie)抗(kang)劑(ji)(ji)抑制作(zuo)用(yong)的(de)(de)(de)長短(duan)。親(qin)和(he)(he)性(xing)可由Schild回(hui)(hui)歸(gui)用(yong)實驗測(ce)定(ding)(ding)，而若拮(jie)(jie)抗(kang)劑(ji)(ji)為(wei)競爭性(xing)，親(qin)和(he)(he)性(xing)也(ye)(ye)可由鄭-普魯薩福方(fang)程(Cheng-Prusoff equation)確(que)定(ding)(ding)。Schild回(hui)(hui)歸(gui)可確(que)定(ding)(ding)拮(jie)(jie)抗(kang)劑(ji)(ji)的(de)(de)(de)種類，并且(qie)測(ce)定(ding)(ding)不受激動劑(ji)(ji)親(qin)和(he)(he)性(xing)、效(xiao)能和(he)(he)濃度的(de)(de)(de)影響，不過要注意測(ce)定(ding)(ding)時需(xu)達到平衡(heng)，并要考慮受體脫(tuo)敏效(xiao)應。但(dan)是Schild回(hui)(hui)歸(gui)無法測(ce)量有(you)多個(ge)效(xiao)應的(de)(de)(de)拮(jie)(jie)抗(kang)劑(ji)(ji)，如會同時阻斷離子通道的(de)(de)(de)競爭性(xing)神經肌肉阻斷劑(ji)(ji)。Schild回(hui)(hui)歸(gui)需(xu)要比(bi)較有(you)無拮(jie)(jie)抗(kang)劑(ji)(ji)時EC50的(de)(de)(de)比(bi)值。當(dang)拮(jie)(jie)抗(kang)劑(ji)(ji)劑(ji)(ji)量變(bian)化時，這個(ge)比(bi)值也(ye)(ye)跟(gen)著變(bian)化，由此作(zuo)出雙對(dui)(dui)數(shu)圖，親(qin)和(he)(he)性(xing)常數(shu)Ki就是回(hui)(hui)歸(gui)直線與x軸(zhou)的(de)(de)(de)交點。

3，可逆性

很多拮抗劑像激(ji)動(dong)劑一樣都是可逆的(de)，它們(men)和(he)受體的(de)結合速(su)率和(he)分離速(su)率遵(zun)循(xun)化學動(dong)力學。

不可(ke)逆(ni)(ni)拮抗(kang)(kang)劑(ji)與受(shou)(shou)(shou)體以共價(jia)鍵相結合，一(yi)般無(wu)法(fa)分離，所以其抑(yi)制作(zuo)用取決(jue)于新受(shou)(shou)(shou)體的(de)(de)生成速率，例如酚芐明與α腎上腺(xian)素受(shou)(shou)(shou)體不可(ke)逆(ni)(ni)結合，阻(zu)止腎上腺(xian)素和(he)(he)去甲腎上腺(xian)素再與受(shou)(shou)(shou)體結合。受(shou)(shou)(shou)體失活通常(chang)(chang)導致量效曲線(xian)的(de)(de)最大效應(ying)降(jiang)低，當(dang)有受(shou)(shou)(shou)體儲備時(shi)也(ye)會(hui)和(he)(he)非競(jing)爭(zheng)性拮抗(kang)(kang)劑(ji)一(yi)樣(yang)產生曲線(xian)右移。評估時(shi)的(de)(de)清(qing)洗(xi)常(chang)(chang)可(ke)區(qu)分非競(jing)爭(zheng)性拮抗(kang)(kang)劑(ji)和(he)(he)不可(ke)逆(ni)(ni)拮抗(kang)(kang)劑(ji)，因為(wei)非競(jing)爭(zheng)性拮抗(kang)(kang)劑(ji)是可(ke)逆(ni)(ni)的(de)(de)，清(qing)洗(xi)能恢復(fu)激動劑(ji)的(de)(de)效應(ying)。

不可(ke)(ke)逆(ni)競爭(zheng)性(xing)拮(jie)抗劑(ji)也與激動(dong)劑(ji)競爭(zheng)活(huo)性(xing)位點，但它與受體(ti)形成共價鍵的(de)速(su)率取決于拮(jie)抗劑(ji)的(de)親和(he)力和(he)反應(ying)活(huo)性(xing)。某些拮(jie)抗劑(ji)可(ke)(ke)能有一段特殊的(de)可(ke)(ke)逆(ni)結合(he)時期(qi)，在(zai)此期(qi)間拮(jie)抗劑(ji)按化學動(dong)力學所(suo)決定的(de)速(su)率與受體(ti)自由結合(he)和(he)分(fen)離。但是，一旦二者形成不可(ke)(ke)逆(ni)的(de)化學鍵，受體(ti)即失(shi)活(huo)。在(zai)功能評(ping)估中，競爭(zheng)性(xing)拮(jie)抗劑(ji)對(dui)量效曲線的(de)影響(xiang)像非(fei)競爭(zheng)性(xing)拮(jie)抗劑(ji)一樣，會使曲線右移，斜率減小(xiao)，最(zui)大反應(ying)降低。

三，分類

1，競爭性拮抗劑

競(jing)(jing)爭(zheng)性(xing)拮(jie)(jie)(jie)抗(kang)(kang)劑(ji)是(shi)與(yu)(yu)相(xiang)(xiang)應內(nei)源(yuan)激動(dong)(dong)劑(ji)配(pei)體(ti)相(xiang)(xiang)互(hu)競(jing)(jing)爭(zheng)相(xiang)(xiang)同受(shou)(shou)體(ti)活性(xing)位點的(de)(de)拮(jie)(jie)(jie)抗(kang)(kang)劑(ji)。這種(zhong)拮(jie)(jie)(jie)抗(kang)(kang)劑(ji)的(de)(de)分子結(jie)(jie)構(gou)與(yu)(yu)相(xiang)(xiang)應激動(dong)(dong)劑(ji)相(xiang)(xiang)似，但(dan)它與(yu)(yu)受(shou)(shou)體(ti)可(ke)逆結(jie)(jie)合(he)后，非但(dan)不激活受(shou)(shou)體(ti)，而且阻(zu)止(zhi)激動(dong)(dong)劑(ji)與(yu)(yu)該受(shou)(shou)體(ti)結(jie)(jie)合(he)。拮(jie)(jie)(jie)抗(kang)(kang)劑(ji)的(de)(de)效(xiao)(xiao)應大(da)小取決于激動(dong)(dong)劑(ji)的(de)(de)濃(nong)度和(he)親(qin)和(he)力(li)。激動(dong)(dong)劑(ji)的(de)(de)濃(nong)度和(he)親(qin)和(he)力(li)越(yue)高，與(yu)(yu)之結(jie)(jie)合(he)得受(shou)(shou)體(ti)就(jiu)越(yue)多，產生(sheng)相(xiang)(xiang)同抑制作用所需的(de)(de)拮(jie)(jie)(jie)抗(kang)(kang)劑(ji)濃(nong)度就(jiu)越(yue)大(da)。在做功效(xiao)(xiao)評估時，競(jing)(jing)爭(zheng)性(xing)拮(jie)(jie)(jie)抗(kang)(kang)劑(ji)可(ke)使(shi)量(liang)效(xiao)(xiao)曲(qu)線(xian)向(xiang)右平移，而斜率和(he)最大(da)效(xiao)(xiao)應不變。白(bai)細(xi)胞(bao)介素(su)1族受(shou)(shou)體(ti)拮(jie)(jie)(jie)抗(kang)(kang)劑(ji)IL-1Ra就(jiu)是(shi)一(yi)種(zhong)競(jing)(jing)爭(zheng)性(xing)拮(jie)(jie)(jie)抗(kang)(kang)劑(ji)。在體(ti)外診斷試劑(ji)免疫過程中一(yi)般會選擇它作為添加劑(ji)。

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2，非競爭性拮抗劑

非(fei)競(jing)爭(zheng)性拮(jie)抗劑(ji)(ji)(ji)(ji)不與相應(ying)激(ji)動(dong)(dong)(dong)劑(ji)(ji)(ji)(ji)競(jing)爭(zheng)相同受體活性位點，但它對激(ji)動(dong)(dong)(dong)劑(ji)(ji)(ji)(ji)的(de)抑制作用無法消(xiao)除。相比競(jing)爭(zheng)性拮(jie)抗劑(ji)(ji)(ji)(ji)只影響能產生(sheng)最(zui)大(da)反(fan)應(ying)的(de)激(ji)動(dong)(dong)(dong)劑(ji)(ji)(ji)(ji)劑(ji)(ji)(ji)(ji)量(liang)，而不影響最(zui)大(da)反(fan)應(ying)的(de)強(qiang)度，非(fei)競(jing)爭(zheng)性拮(jie)抗劑(ji)(ji)(ji)(ji)減小(xiao)了激(ji)動(dong)(dong)(dong)劑(ji)(ji)(ji)(ji)能產生(sheng)的(de)最(zui)大(da)反(fan)應(ying)。在(zai)量(liang)效曲(qu)線中，非(fei)競(jing)爭(zheng)性拮(jie)抗劑(ji)(ji)(ji)(ji)使最(zui)大(da)效應(ying)下降，有(you)時(shi)還(huan)使曲(qu)線右(you)(you)移。曲(qu)線右(you)(you)移是(shi)因為當受體儲(chu)備(亦稱空閑受體)消(xiao)耗(hao)完后拮(jie)抗劑(ji)(ji)(ji)(ji)才會產生(sheng)抑制效應(ying)。這種不建議試劑(ji)(ji)(ji)(ji)，會大(da)大(da)提高(gao)免疫(yi)診斷(duan)試劑(ji)(ji)(ji)(ji)假陽。

非競爭性拮抗劑有兩種抑制機理。第一種是拮抗劑與受體的活性位點結合，這種結合幾乎不可逆。第二種是拮抗劑與受體的一個和活性位點不同的別構位點結合。這種拮抗劑雖然不與激動劑競爭活性位點，但它會導致受體構型改變。例如環噻嗪就是代謝型谷氨酸受體1的可逆非競爭性拮抗劑。

3，沉默拮抗劑

沉默拮(jie)(jie)抗劑(ji)(ji)(ji)是對受體沒(mei)有(you)任何內在(zai)活性的(de)競爭性拮(jie)(jie)抗劑(ji)(ji)(ji)。從某種(zhong)程度上說它們(men)才是真正的(de)拮(jie)(jie)抗劑(ji)(ji)(ji)。這(zhe)個術語的(de)出現是為了把它們(men)和部分激動(dong)劑(ji)(ji)(ji)以及反激動(dong)劑(ji)(ji)(ji)區分開來(lai)。

4，部分激動劑

部(bu)分(fen)(fen)激(ji)(ji)動(dong)(dong)(dong)(dong)劑(ji)(ji)(ji)是對受體(ti)的(de)(de)最大作用比完全(quan)激(ji)(ji)動(dong)(dong)(dong)(dong)劑(ji)(ji)(ji)小(xiao)的(de)(de)一類藥(yao)物。雖然它們也是激(ji)(ji)動(dong)(dong)(dong)(dong)劑(ji)(ji)(ji)，但是在和完全(quan)激(ji)(ji)動(dong)(dong)(dong)(dong)劑(ji)(ji)(ji)競(jing)爭時會(hui)降(jiang)低完全(quan)激(ji)(ji)動(dong)(dong)(dong)(dong)劑(ji)(ji)(ji)對受體(ti)的(de)(de)激(ji)(ji)活效(xiao)應，從而(er)起到拮抗劑(ji)(ji)(ji)的(de)(de)作用。臨床(chuang)(chuang)上，部(bu)分(fen)(fen)激(ji)(ji)動(dong)(dong)(dong)(dong)劑(ji)(ji)(ji)可(ke)以(yi)(yi)改善有缺陷的(de)(de)機能而(er)又不矯(jiao)枉過正。讓(rang)受體(ti)接(jie)觸高(gao)濃(nong)度的(de)(de)部(bu)分(fen)(fen)激(ji)(ji)動(dong)(dong)(dong)(dong)劑(ji)(ji)(ji)能保(bao)證不管完全(quan)激(ji)(ji)動(dong)(dong)(dong)(dong)劑(ji)(ji)(ji)濃(nong)度如何，受體(ti)都有較(jiao)弱但持(chi)續(xu)的(de)(de)活性。另外，有研究(jiu)顯示部(bu)分(fen)(fen)激(ji)(ji)動(dong)(dong)(dong)(dong)劑(ji)(ji)(ji)能防止重復接(jie)觸強效(xiao)的(de)(de)完全(quan)激(ji)(ji)動(dong)(dong)(dong)(dong)劑(ji)(ji)(ji)或拮抗劑(ji)(ji)(ji)常常帶來的(de)(de)適應性調節機制。μ-阿片(pian)受體(ti)的(de)(de)部(bu)分(fen)(fen)激(ji)(ji)動(dong)(dong)(dong)(dong)劑(ji)(ji)(ji)丁丙諾啡有較(jiao)弱的(de)(de)嗎啡活性，臨床(chuang)(chuang)上用于控制疼痛(tong)的(de)(de)鎮(zhen)痛(tong)藥(yao)，以(yi)(yi)及代替美沙酮(tong)治(zhi)療鴉片(pian)成癮。

5，反激動劑

反激動(dong)劑(ji)和(he)拮(jie)抗劑(ji)有(you)相似(si)效(xiao)果(guo)，但(dan)它(ta)引起的(de)(de)下游(you)生物(wu)反應不(bu)同(tong)。反激動(dong)劑(ji)作用于本身有(you)基礎活性的(de)(de)受(shou)(shou)體，它(ta)不(bu)僅像普(pu)通(tong)的(de)(de)拮(jie)抗劑(ji)一樣阻礙激動(dong)劑(ji)與受(shou)(shou)體結合，而且還抑(yi)制了受(shou)(shou)體的(de)(de)基礎活性。這(zhe)一發(fa)現使很多先(xian)前認(ren)為是拮(jie)抗劑(ji)的(de)(de)藥(yao)物(wu)被重新劃分(fen)為反激動(dong)劑(ji)。例如抗組(zu)織胺藥(yao)先(xian)前認(ren)為是組(zu)織胺H1受(shou)(shou)體拮(jie)抗劑(ji)，重新劃分(fen)為反激動(dong)劑(ji)。