標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品是標(biao)(biao)(biao)記免(mian)疫(yi)分(fen)(fen)析定(ding)量(liang)的(de)依(yi)據。標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品的(de)正確與(yu)否直接影(ying)響樣(yang)品的(de)測定(ding)結果(guo)(guo)。如果(guo)(guo)在連續測定(ding)中，或各實驗室之間使用(yong)的(de)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品不一(yi)致，則可(ke)影(ying)響到實驗結果(guo)(guo)的(de)可(ke)比性。為此，對標(biao)(biao)(biao)記免(mian)疫(yi)分(fen)(fen)析所(suo)使用(yong)的(de)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品應滿足如下要求。

1．化學結構：原則上標準品應與被測物具有完全相同的化學結構，包括相同的立體化學結構。但在實際工作中，用化學結構完全相同的物質作標準品是十分困難的。這是由于一方面來源有限，另一方面有些被測物本身的化學結構還不清楚，或是有明顯的異型性。所以有時也用結構類似的物質作標準品。此時，應充分了解這些物質與真正標準品之間的定量關系。

2．化學純度：所有通過化學合成法制備的小分子化合物，都應是高化學純度的純品。對某些蛋白類物質，則可能由于純化的方法不同而有差異。對此，在最初建立該方法時，應與國際上公認的標準參考品或高純度的純品進行比對。

3．免疫純度：標記免疫分析是通過比較被測物質與標準品的免疫活性實現的，故被測物質與標準品對所用抗體的免疫活性應該完全一致，即兩者對所用的同一抗體有完全相同的親和力。因此，標準品的免疫純度比其化學純度更重要。

4．反應介質：免疫學反應受反應介質和溫度等條件的影響，所以理論上要求標準品和被測物應在完全相同的介質中進行反應。如測定血清中某物質的濃度，其所用的標準品也應溶解在無被測物的零值血清中；如測定尿液中某物質的濃度，其所用的標準品也應溶解在無被測物的尿液中等。但在實際工作中這一點很難做到。因為，血清中的成分十分復雜，因而無被測物的零值血清的制備非常困難，而且個體血清中還可能存在一些干擾物質。理想的標準品應該用與被測樣品相同的基質(如血清)，先將被測物質完全去除，然后再加入已知量的被測物質的純品。

5．干擾物質：標準品中不能有干擾分析的物質。在作為標準品使用前，必須對那些從機體提取到的大分子物質活性進行測定。

6．標準品的批量：為保證檢測的連續可比性，每批標準品應有相當大的量，以保證在較長的時間內使用。每批標準品如保存的條件適當，在相當長的時間內可保持其濃度和免疫活性的穩定。這對于生產標記免疫分析試劑的廠家尤為重要。

二．標準品的分級

所(suo)謂(wei)標準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)在(zai)英語(yu)中有三(san)個(ge)名詞，即(ji)標準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(standard)、校(xiao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(calibrator)、和參考品(pin)(pin)(reference)。這三(san)個(ge)名詞的(de)意義不完全相同，但在(zai)國內它(ta)們則經(jing)常被混淆。目前在(zai)我國的(de)標記免(mian)疫分析實踐中，所(suo)謂(wei)的(de)"標準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)"實際上(shang)是(shi)指校(xiao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)。為使用方便先仍用"標準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)一(yi)詞"。

有關標準品可分為如下的等級：

【國際參考品(international reference)】：國際參考品是由WHO指定的實驗室制備，并與有關國家的一定機構聯系(在我國是衛生部藥品與生物制品檢定所)，被國際公認為最高級別的標準品。到目前為止，與標記免疫分析有關的已達數十種。但由于標記免疫分析方法的迅速發展，很多標記免疫分析方法還沒有國際參考品。

【國家級標準品】：國家(jia)級標(biao)準品(pin)是由國家(jia)的(de)有關(guan)權威機構，用高(gao)化(hua)學純和高(gao)免疫純、低交叉反應的(de)純品(pin)制(zhi)備的(de)，供國家(jia)內部(bu)使用。國家(jia)級標(biao)準品(pin)應與國際參考品(pin)或其(qi)他(ta)國家(jia)的(de)國家(jia)級標(biao)準品(pin)進行比對。我國現已有國家(jia)級標(biao)準品(pin)數(shu)種，如(ru)胰(yi)島素(insulin)、絨毛膜促性腺素(hCG)、三碘甲(jia)(jia)狀腺(xian)原氨酸(T3)、甲(jia)(jia)狀腺(xian)素(su)(T4)、肝膽(dan)酸(CG)、甲胎蛋白(AFP)等(deng)。

【實驗室標準】：實驗室標準是由實驗室自己，或由生產廠家制備的標準品，又稱二級標準品。所有的二級標準品都必須經過與國家標準品或國際參考品進行比對或校正。如沒有國際參考品或國家級標準品的，也應與國際公認的生產廠家的標準品進行比對。

三、標準品的制備、鑒定、與計量

1．標準品的制備：標準品的制備是非常復雜的問題，也是標記免疫分析中比較難于制備的一個成分。以下討論的是實驗室標準品(或商品化試劑中標準品)的制備。

1）基質的制備：如前(qian)所(suo)述(shu)，作為標準(zhun)品(pin)(pin)的(de)介質(基質)成分(fen)應與被(bei)測樣(yang)品(pin)(pin)相同。對大多數用于測定血清(qing)中(zhong)某物(wu)質的(de)標準(zhun)品(pin)(pin)，應用不含被(bei)測物(wu)質的(de)零血清(qing)制(zhi)備(bei)，以求反應的(de)介質環境相當。但有時零值血清(qing)的(de)制(zhi)備(bei)十分(fen)困難，所(suo)以有些標準(zhun)品(pin)(pin)用適當的(de)緩(huan)沖液制(zhi)備(bei)，并在(zai)緩(huan)沖液中(zhong)加入一(yi)定量的(de)載體蛋白(一般用1%～2%的牛血清(qing)白(bai)蛋白(bai))，以(yi)便使其與樣品的介質(zhi)環(huan)境相近。

零值血清的制備方法有：

1)吸附(fu)法：血(xue)清中小分子物(wu)質(zhi)如三碘甲(jia)狀腺原氨酸(T3)、甲(jia)狀腺素(T4)等(deng)，可用活性炭吸附(fu)去除(chu)。這(zhe)種方法簡便，但待測物(wu)質(zhi)難以清除(chu)干凈，而且(qie)大分子活性物(wu)質(zhi)不(bu)能(neng)用此法進行(xing)制備。

(2)反復凍融(rong)(rong)法：對大(da)分子活(huo)性物質(zhi)可選用低值(zhi)血(xue)清(qing)(qing)，經反復凍融(rong)(rong)使(shi)被測物質(zhi)失活(huo)。用這種方法可使(shi)某些蛋白類(lei)激素大(da)部(bu)分失活(huo)，但(dan)也(ye)難以得到真正的零值(zhi)血(xue)清(qing)(qing)。

(3)親(qin)和(he)層(ceng)析法(fa)：用(yong)特(te)異性抗體制備親(qin)和(he)層(ceng)析柱，用(yong)以吸附被(bei)測抗原(yuan)。用(yong)這種方法(fa)可以得到高(gao)(gao)質(zhi)量(liang)的零值血清，但(dan)本法(fa)比較復(fu)雜(za)而(er)且成本也(ye)高(gao)(gao)。

2）標準物純品的選擇：應選擇高化學純和高免疫純的純品作標準品。其中免疫純尤為重要，在標準品中不應含有與被測物質有交叉反應的物質。

3）標準品的制備：先用零值血清配置高濃度的標準品，然后根據實驗系統的要求，用零值血清將高值血清稀釋至應有的濃度，制成符合預定要求的，由不同濃度組成的系列標準品。

2．標準品的鑒定

1）免疫活性的鑒定：選(xuan)用(yong)高特異性(xing)的(de)(de)(de)抗血清分別作公認標準品(如(ru)WHO的(de)(de)(de)國(guo)際(ji)參考品或國(guo)家標準品)的(de)(de)(de)待鑒定(ding)標準品的(de)(de)(de)劑量反應曲線，并觀察兩(liang)(liang)條曲(qu)(qu)線的(de)平(ping)行性(xing)(xing)(xing)。如(ru)兩(liang)(liang)條劑量反應曲(qu)(qu)線平(ping)行，說(shuo)明(ming)(ming)兩(liang)(liang)種(zhong)物(wu)(wu)質(zhi)對(dui)同(tong)一(yi)抗體有(you)相同(tong)的(de)親和力，即二者(zhe)是(shi)同(tong)質(zhi)性(xing)(xing)(xing)物(wu)(wu)質(zhi)。如(ru)兩(liang)(liang)條劑量反應曲(qu)(qu)線不平(ping)行，說(shuo)明(ming)(ming)兩(liang)(liang)種(zhong)物(wu)(wu)質(zhi)具(ju)有(you)異質(zhi)性(xing)(xing)(xing)，因而這一(yi)待鑒定的(de)標(biao)準品是(shi)不能使用的(de)。

2）濃度的標定：用已鑒定過的，免疫活性合格的標準品，與公認的標準品作濃度相同的劑量反應曲線。此時，兩條劑量反應曲線應該是基本重合的。如果兩者平行但不重合，則取兩條劑量反應曲線的50%結合處的相應劑量( **** )計算二者的換算系數，然后調整待鑒定標準品的濃度，直至使兩條劑量反應曲線完全或基本重合為止。

3．標準品的計量：

許多小分子抗原或半(ban)抗原已能得(de)(de)到(dao)純品(pin)或進行合成，它們對作為標準品(pin)的要(yao)求可以得(de)(de)到(dao)基(ji)本的滿足，其計量多直接用單位體積中的(de)(de)重量(liang)表示，如mg / ml、ng / ml 、pg / ml等。最(zui)近WHO推薦用(yong)質(zhi)(zhi)量(liang)單(dan)位取代重量(liang)單(dan)位，即mol / L、mmol / L、或nmol / L等。對大分(fen)子的(de)(de)活性物質(zhi)(zhi)則(ze)比較復(fu)雜。由(you)于得不到絕對的(de)(de)純(chun)品，故很難直(zhi)接(jie)用(yong)單(dan)位體積中的(de)(de)重量(liang)或單(dan)位體積中的(de)(de)質(zhi)(zhi)量(liang)計量(liang)。因此，常用(yong)該物質(zhi)(zhi)的(de)(de)生物活性單(dan)位表示，如IU / L、mIU / L等。

四．標準品的穩定性與保存

如前所述，為保(bao)(bao)證檢測(ce)的(de)連續可比性，每(mei)批(pi)標(biao)準(zhun)品應(ying)有相當(dang)大(da)的(de)量，以保(bao)(bao)證能在(zai)(zai)較長時(shi)間內使用(yong)。因此，每(mei)批(pi)標(biao)準(zhun)品應(ying)在(zai)(zai)適(shi)當(dang)的(de)條件下保(bao)(bao)存，使其免疫活(huo)性和濃度保(bao)(bao)持(chi)穩(wen)定。

1．影響標準品穩定的因素

1）基質中的酶、細菌污(wu)染、pH的變化(hua)、氧化(hua)、潮濕等因素都可(ke)以導(dao)致標準(zhun)品的變性，而且這些變化(hua)可(ke)因高溫和光照加(jia)速。

2）在(zai)保存過程中發生聚合反應(ying)等分子結構的變化，可(ke)使(shi)標準品失活。

3）容器內壁的吸附作用和溶劑的蒸發可造成(cheng)標準(zhun)品濃度的改變。

4）保存條(tiao)件(jian)不(bu)適(shi)當(dang)也可以影(ying)響標(biao)準品的穩(wen)定性，如反復的凍(dong)融(rong)可降(jiang)低標(biao)準品的免疫活(huo)性等。

2．標準品的保存方法

1）冷(leng)凍(dong)干(gan)(gan)燥法(fa)(fa)：冷(leng)凍(dong)干(gan)(gan)燥對標準(zhun)(zhun)品的(de)(de)濃(nong)度(du)和免(mian)疫(yi)活性(xing)無明顯的(de)(de)影響，是(shi)目前最常用(yong)的(de)(de)保存方法(fa)(fa)。冷(leng)凍(dong)干(gan)(gan)燥制(zhi)品在低溫下(xia)，可在較長的(de)(de)時間內保持穩定。但應用(yong)冷(leng)凍(dong)干(gan)(gan)燥制(zhi)品時，復溶(rong)體積的(de)(de)準(zhun)(zhun)確(que)度(du)十(shi)分重(zhong)要。因此，要用(yong)經過校準(zhun)(zhun)的(de)(de)量器準(zhun)(zhun)確(que)的(de)(de)復溶(rong)，以減(jian)少標準(zhun)(zhun)品的(de)(de)濃(nong)度(du)誤差。

2）在標(biao)準品(pin)中加一定量(liang)的防腐(fu)劑可減少細菌污染的影響。

3）密閉真空(kong)保(bao)(bao)存(cun)(cun)或充入惰性氣(qi)體等方法(fa)(fa)也可(ke)以增加標準品(pin)的穩定性。目前最常(chang)用的方法(fa)(fa)是：在(zai)標準品(pin)中加入少量的防(fang)腐劑(ji)(如(ru)0.1%疊(die)氮(dan)鈉或0.1%硫(liu)柳汞)，冷凍干燥后(hou)密封，并(bing)(bing)在(zai)低(di)溫(wen)下保(bao)(bao)存(cun)(cun)。但應(ying)注意，一(yi)旦復溶后(hou)應(ying)放低(di)溫(wen)保(bao)(bao)存(cun)(cun)，并(bing)(bing)不(bu)得(de)反復凍溶。復溶后(hou)的標準品(pin)其(qi)有(you)效期明顯縮短，一(yi)般不(bu)超過6～8周，有(you)些物質可(ke)能更(geng)短。