化(hua)學發(fa)光(guang)技(ji)(ji)術(shu)是近二、三十(shi)年來發(fa)展起來的(de)一種測定方式(shi)。該技(ji)(ji)術(shu)的(de)原理是利用化(hua)學反應釋(shi)放(fang)的(de)自由能激(ji)發(fa)中(zhong)間體(常(chang)用堿(jian)性磷酸酶-金剛(gang)烷胺、辣根過(guo)氧(yang)化(hua)酶-魯米(mi)(mi)諾衍(yan)生物(wu)、辣根過(guo)氧(yang)化(hua)酶-魯米(mi)(mi)諾衍(yan)生物(wu)），使其從激(ji)發(fa)態(tai)(tai)回(hui)到基態(tai)(tai)。當(dang)中(zhong)間體從激(ji)發(fa)態(tai)(tai)回(hui)到基態(tai)(tai)時會釋(shi)放(fang)等能級的(de)光(guang)子，對(dui)光(guang)子進行測定而進行定量(liang)分(fen)(fen)析(xi)。化(hua)學發(fa)光(guang)具有熒(ying)光(guang)的(de)特(te)異性，同時不需要激(ji)發(fa)光(guang)，避免(mian)了熒(ying)光(guang)分(fen)(fen)析(xi)中(zhong)激(ji)發(fa)光(guang)雜散(san)光(guang)的(de)影響從而提高了靈敏度，并且避免(mian)了放(fang)射分(fen)(fen)析(xi)造成的(de)環(huan)境污(wu)染和健康危(wei)害，是一種非(fei)常(chang)優秀的(de)定量(liang)分(fen)(fen)析(xi)方法。

化學(xue)發光免疫分(fen)析（CLIA）是一種(zhong)高度敏感(gan)的(de)微(wei)量測定技術，凡具有抗原性的(de)物(wu)質（包括半抗原）都可以用(yong)CLIA測定。CLIA起(qi)步于(yu)80年代初，快速發展于(yu)90年代具備以下特點(dian) ：

①高度(du)敏感(gan)，極(ji)限達10-17－10-19mol/L，遠(yuan)高于放射(she)性免(mian)疫（RIA）、酶(mei)聯(lian)免(mian)疫（EIA）。與(yu)時間(jian)分辨熒光免(mian)疫分析(TRFIA)相當，但比TRFIA便宜。

②特(te)異性強，重復性好(hao)CV＜10％。

③測(ce)定范圍寬，可達(da)7個數量級。

④試劑穩(wen)定性好，無污染有效期12月。

⑤操作簡單，易于(yu)自動化。

磁(ci)(ci)微粒化(hua)(hua)(hua)學(xue)發光免(mian)疫分(fen)析(xi)(xi)是將(jiang)磁(ci)(ci)性分(fen)離技(ji)術(shu)、化(hua)(hua)(hua)學(xue)發光技(ji)術(shu)、免(mian)疫分(fen)析(xi)(xi)技(ji)術(shu)三者結合起來的一種新興分(fen)析(xi)(xi)方法，其基本原理見圖3 。該技(ji)術(shu)充分(fen)利用(yong)了磁(ci)(ci)性分(fen)離技(ji)術(shu)的快速易自動化(hua)(hua)(hua)性，化(hua)(hua)(hua)學(xue)發光技(ji)術(shu)的高(gao)靈敏度性，以及(ji)免(mian)疫分(fen)析(xi)(xi)的特異性，在(zai)生(sheng)物分(fen)析(xi)(xi)領域展(zhan)現了不可替(ti)代的作用(yong)。

磁微粒化學發光免疫檢測（雙抗夾心法）

目前磁微粒化(hua)(hua)學分(fen)析免疫(yi)分(fen)析已經應(ying)用于管式化(hua)(hua)學發光免疫(yi)檢(jian)測項(xiang)目以及電化(hua)(hua)學發光免疫(yi)檢(jian)測項(xiang)目。

磁珠用于化學發光領域的方法

間接法

間(jian)接法就(jiu)是(shi)包被(bei)抗(kang)(kang)原(yuan)，然后用酶(mei)標(biao)(biao)記的(de)(de)(de)抗(kang)(kang)抗(kang)(kang)體檢測(ce)樣本(ben)中抗(kang)(kang)體，基本(ben)原(yuan)理見圖(tu)4，適合于檢測(ce)對(dui)(dui)象(xiang)是(shi)自身抗(kang)(kang)體的(de)(de)(de)情況。間(jian)接法的(de)(de)(de)優點：相對(dui)(dui)較方便，只要變(bian)換包被(bei)抗(kang)(kang)原(yuan)就(jiu)可以檢測(ce)不(bu)同的(de)(de)(de)項目。間(jian)接法的(de)(de)(de)缺點：標(biao)(biao)本(ben)中的(de)(de)(de)特異性抗(kang)(kang)體會競爭性的(de)(de)(de)結合抗(kang)(kang)原(yuan)，使結果出現(xian)假陰性。

圖4. 采用間接法進行化學發光檢測基本原理

操作步驟：

a)磁性微球表面固定抗原。

b)加入樣本(ben)（含目標抗體）孵育，清洗。

c)加(jia)入酶標抗抗體(ti)孵(fu)育，清洗。

d)加(jia)發(fa)光(guang)底物(wu)，檢(jian)測(ce)信(xin)號(hao)。

捕獲法

血清(qing)中針對某些抗(kang)原的(de)特異性(xing)IgM常和特異性(xing)IgG同時存在，后者(zhe)會(hui)干擾(rao)IgM抗(kang)體的(de)測定，因(yin)此測定IgM抗(kang)體多用(yong)捕(bu)獲(huo)法。基(ji)本原理(li)如圖5所(suo)示，先將(jiang)所(suo)有(you)血清(qing)IgM（包(bao)括(kuo)異性(xing)IgM和非(fei)特異性(xing)IgM）固定在固相(xiang)上，去除IgG后測定特異性(xing)IgM。

 采用捕獲法進行化學發光檢測基本原理

操作步驟：

a)將抗(kang)人IgM抗(kang)體(ti)連(lian)接在固相載體(ti)上(shang)形成固相抗(kang)人IgM，洗(xi)滌(di)。

b)加(jia)入稀(xi)釋的血清標本中(zhong)的IgM抗體(ti)被固相(xiang)抗體(ti)捕獲(huo)洗滌除去其他(ta)免疫球蛋白(bai)和血清中(zhong)的雜質成(cheng)分。

c)加入特(te)異(yi)性(xing)抗(kang)原試劑：它只(zhi)與固相上(shang)的特(te)異(yi)性(xing)IgM結合洗(xi)滌。

d)加(jia)入針對特(te)異性的酶標抗體(ti)：使之與結合在固相上的抗原反應結合洗滌。

e)加(jia)底物顯色，檢測信號。

固相抗原競爭法

競爭法(fa)，是指受(shou)檢抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)和(he)酶(mei)(mei)標(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)競爭性(xing)的與(yu)磁珠(zhu)表(biao)面(mian)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)結(jie)合。固相抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)競爭法(fa)基(ji)本(ben)原(yuan)理如(ru)圖(tu)6所示。結(jie)合于固相載(zai)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)的酶(mei)(mei)標(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)與(yu)受(shou)檢抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)的量(liang)呈反比。若(ruo)受(shou)檢樣本(ben)中(zhong)無抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)，酶(mei)(mei)標(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)能夠順利與(yu)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)結(jie)合，出現強信(xin)號。若(ruo)受(shou)檢樣本(ben)中(zhong)有抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)，則(ze)競爭性(xing)的占去了酶(mei)(mei)標(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)與(yu)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)的結(jie)合，酶(mei)(mei)標(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)的結(jie)合力減弱(ruo)，信(xin)號強度(du)減弱(ruo)。

.采用固相抗原競爭法進行化學發光檢測基本原理

操作步驟：

a)磁珠表面固(gu)定特(te)異性(xing)抗原。

b)加(jia)受(shou)檢標本和酶標抗原的混合液(ye)孵育(yu)。

c)加(jia)發光底物，檢測(ce)信(xin)號。

雙抗夾心（兩步法）

雙抗(kang)體夾心法是檢測抗(kang)原(yuan)(yuan)最常用(yong)的方(fang)法，基(ji)本原(yuan)(yuan)理如圖(tu)7所(suo)示。

 采用雙抗夾心法（兩步法）進行化學發光檢測基本原理

操作步驟：

a)將特(te)異性抗(kang)體與(yu)固相載體連接，形成固相抗(kang)體：洗滌除去未結合的(de)抗(kang)體及雜。

b)加受檢(jian)標本(ben)：使之(zhi)與固相抗體接觸反應一(yi)段時問，讓標本(ben)中的抗原與固相載體上(shang)的抗體結(jie)合，形(xing)成(cheng)固相抗原復(fu)合物。洗滌(di)除去其(qi)他(ta)未結(jie)合的物質。

c)加酶標(biao)抗(kang)體(ti)：使(shi)固(gu)(gu)相(xiang)免疫復合(he)物上(shang)的抗(kang)原與酶標(biao)抗(kang)體(ti)結(jie)合(he)。徹底(di)洗滌未(wei)結(jie)合(he)的酶標(biao)抗(kang)體(ti)。此時固(gu)(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)上(shang)帶(dai)有的酶量與標(biao)本(ben)中受檢物質的量成正相(xiang)關。

d)加發光底物(wu)：夾(jia)心(xin)式復合物(wu)中的酶催化底物(wu)成為有色產物(wu)。根據顏色反(fan)應的程度進行(xing)該抗原的定性或定量。

雙抗夾心法（一步法）

在一(yi)步(bu)法(fa)測定中，應注意(yi)鉤狀(zhuang)效應（hook effect），類(lei)同于沉淀反應中抗原過剩(sheng)的后(hou)帶現象(xiang)。當標本中待(dai)測抗原濃度(du)相當高時，過量抗原分別和固相抗體及(ji)酶標抗體結(jie)合，而不再形成夾心復合物，所得結(jie)果將低于實際含量。鉤狀(zhuang)效應嚴(yan)重時甚至可出現假陰(yin)性(xing)結(jie)果（如圖8， 雙抗夾心法(fa)及(ji)雙位(wei)點一(yi)步(bu)法(fa)。缺點：假陰(yin)性(xing)）

采用雙抗夾心法（一步法）進行化學發光檢測基本原理

采用雙抗夾心法（一步法）進行化學發光檢測，當樣本中抗原量較多是，容易出現假陰性。

操作步驟：

a)磁(ci)珠表(biao)面固定一抗。

b)加(jia)樣本和酶標二(er)抗孵育，清洗。

c)加發(fa)光底物(wu)，檢測信號(hao)。